实验名称：放射性同位素标记的DNA序列测定分析

描述：

测定DNA 的核苷酸序列是分析基因结构与功能关系的前提。从小片段重叠法到加减法、双脱氧链终止法、化学降解法、自动测序，DNA 测序技术发展很快。目前在实验室手工测序常用Sanger双脱氧链终止法。Sanger法就是使用DNA 聚合酶和双脱氧链终止物测定DNA 核苷酸序列的方法。它要求使用一种单链的DNA 模板或经变性的双链DNA 模板和一种恰当的DNA 合成引物。其基本原理是DNA 聚合酶利用单链的DNA 模板，合成出准确互补链，在合成时，某种dNTP换成了ddNTP，这时，DNA 聚合酶利用2’，3’-双脱氧核苷三磷酸作底物，使之掺入到寡核苷酸链的3’末端，导致3’末端无3’-OH，从而终止DNA 链的生长，双脱氧核苷酸的种类不同，掺入的位置不同就造成了在不同的专一位置终止的长度不同的互补链。通过掺入放射性核苷酸和聚丙烯酰胺凝胶电泳，即可读出模板DNA 的互补链序列。

• 
  
  
• 原始文档：
• 不允许下载，正式客户可自由下载，点击登录或注册
• 实验步骤快捷卡
• 不允许查看，正式客户可自由查看，点击登录或注册